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研究測(cè)試(三)| 緩沖體系可能對(duì)LNP的性質(zhì)與穩(wěn)定性有較大影響

更新時(shí)間:2023-08-30   點(diǎn)擊次數(shù):2069次

我們接著這個(gè)話題,通過(guò)一篇美國(guó)俄勒岡州立大學(xué)藥學(xué)院的研究論文,進(jìn)一步討論緩沖體系對(duì)mRNA-LNP的影響,供大家參考。該研究測(cè)試了三種常見(jiàn)生物緩沖液——HEPES、Tris和PBS——在單次凍融前后與DLin-MC3-DMA mRNA-LNP制劑的相容性。通過(guò)電子顯微鏡、差示掃描量熱法和膜流動(dòng)性分析發(fā)現(xiàn),不同緩沖液使LNP形態(tài)發(fā)生了不同的結(jié)構(gòu)變化。采用體外和體內(nèi)模型測(cè)量mRNA轉(zhuǎn)染效率,發(fā)現(xiàn)Tris或HEPES緩沖液中的LNPs具有更好的冷凍保護(hù)效果以及與PBS相比更高的轉(zhuǎn)染效率。

 

試驗(yàn)結(jié)果:

脂質(zhì)納米顆粒(LNP)通常通過(guò)透析或與生理緩沖液(如PBS)交換緩沖液來(lái)中和,純化后可直接注射入生物體。此外,緩沖體系可以作為冷凍保護(hù)劑,減輕LNP制劑在低溫儲(chǔ)存時(shí)的穩(wěn)定性問(wèn)題。

 

值得注意的是,F(xiàn)DA批準(zhǔn)的C*V*D-19疫苗Spikevax和Comirnaty使用不同的緩沖液,這表明不同的mRNA-LNP制劑可能對(duì)緩沖體系有不同的要求。(筆者注:Comirnaty上市后制劑處方中緩沖體系由PBS變更為了Tris,詳細(xì)信息請(qǐng)參考:《Moderna:使用TRIS緩沖體系可提高mRNA穩(wěn)定性》

 

因此,為L(zhǎng)NP制劑篩選適宜的緩沖體系是一個(gè)ji具價(jià)值的研究課題。然而,緩沖體系對(duì)LNP的結(jié)構(gòu)形態(tài)、包封率和轉(zhuǎn)染效率方面的作用迄今尚未得到充分研究。

 

分享的研究中,使用常用陽(yáng)離子脂質(zhì)DLin-MC3-DMA制備mRNA-LNP,在-20℃低溫冷凍3周,比較了LNP凍存前后的理化性質(zhì)和生物學(xué)活性(體外+體內(nèi))。

 

結(jié)果表明,通過(guò)體外和體內(nèi)轉(zhuǎn)染衡量,在HEPES和Tris體系中的LNPs總體上優(yōu)于PBS。與PBS相比,HEPES和Tris作為冷凍保護(hù)劑,可以在更大程度上保存LNPs的結(jié)構(gòu)和mRNA的遞送效率。

 

此外,儲(chǔ)存在HEPES中的LNPs在FT循環(huán)后形成了du特的沙漏狀結(jié)構(gòu),而Tris和PBS在凍融后都產(chǎn)生了高度聚集的結(jié)構(gòu)。因此,HEPES可以為L(zhǎng)NPs提供更好的保護(hù),防止pH梯度急劇下降,防止LNP聚集,最終控制相分離過(guò)程。另一方面,使用Tris對(duì)轉(zhuǎn)染特別有益,這表明緩沖鹽等輔料在LNP制劑中的作用可能被大大低估了。

 

通過(guò)分享該研究,艾偉拓產(chǎn)品團(tuán)隊(duì)希望揭示LNP制劑處方研發(fā)過(guò)程中,緩沖體系選擇的重要性,希望能夠?yàn)閺V大核酸遞送企業(yè)及相關(guān)從業(yè)者帶來(lái)一定的參考。

 

未來(lái),艾偉拓產(chǎn)品團(tuán)隊(duì)也會(huì)持續(xù)關(guān)注核酸遞送制劑處方相關(guān)研究進(jìn)展,包括不同劑型(如凍干劑型)、不同存儲(chǔ)條件(如2~8℃冷藏存儲(chǔ))、不同LNP脂質(zhì)組分及不同載荷等因素對(duì)LNP制劑輔料選擇的影響。

如需了解更多相關(guān)信息,您也可以與所在區(qū)域艾偉拓銷(xiāo)售人員聯(lián)系,或聯(lián)系我們!


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